細胞生物學平臺

細胞運動能力檢測



 

細胞運動能力
細胞運動具有粘附性和趨向性。當細胞受到外界刺激時，細胞內的粘附趨化因子激活，根據刺激性質做出不同的反應，細胞在骨架蛋白的作用下細胞伸出偽足，會在支撐物上反復的粘附和脫離，向刺激點或者遠離刺激點運動。不同的刺激條件下會有不同的反應，根據細胞對不同刺激的反應，一般使用細胞劃痕實驗、細胞遷移能力實驗、細胞侵襲能力實驗檢測細胞的運動能力。
 
細胞劃痕實驗是體外模擬細胞遷移能力和修復能力快捷的檢測方法。
實驗流程：
1.1、在六孔板中待細胞長滿后，使用移液器槍頭或其他硬物在六孔板中劃1-3條平行的直線，加入PBS輕輕搖晃，去除PBS，重復使用PBS洗5次，以去除劃出的細胞；
1.2、細胞分別培養0h、12h、24h后，觀察細胞往中線遷移情況，同時使用ImageJ軟件對劃痕的距離進行檢測，以判斷細胞遷移能力。
懸浮細胞不適宜做細胞劃痕實驗。

細胞遷移和侵襲

實驗是體外模擬腫瘤細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養板中，將腫瘤細胞接種于小室中，利用培養液成分的差異誘導細胞運動，檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。
實驗流程：
1 細胞遷移：
1.1、細胞經不同刺激后，去除細胞培養基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶將細胞消化后將細胞轉移至離心管中，1000rpm常溫離心5min；
1.2、使用無血清培養基將細胞重懸，使用血球計數板對細胞計數，接種5×10⁴個細胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培養基，輕輕混勻后放入培養箱中培養8h；
1.3、去除上室和下室中的培養基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常溫固定細胞10min；
1.4、加入PBS洗2次，加入結晶紫染色液，常溫染色20min，使用棉簽輕輕擦拭以去除未遷移的細胞，加入水或者PBS洗兩次，去除殘留的染色液；
1.5、將transwell小室放在顯微鏡下拍照。
2 細胞侵襲：
2.1、將matrigel放入4℃冰箱融化過夜，加入預冷的PBS，1:3比例將matrigel稀釋，使用預冷的移液器將matrigel加入transwell小室上室中，輕輕加入防止出現氣泡，加好后，將transwell小室放入細胞培養箱中凝固30min；
2.2、細胞經不同刺激后，去除細胞培養基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶將細胞消化后將細胞轉移至離心管中，1000rpm常溫離心5min；
2.3、使用無血清培養基將細胞重懸，使用血球計數板對細胞計數，接種1*10⁵個細胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培養基，輕輕混勻后放入培養箱中培養24h；
2.4、去除上室和下室中的培養基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常溫固定細胞10min；
2.5、加入PBS洗2次，加入結晶紫染色液，常溫染色20min，使用棉簽輕輕擦拭以去除未遷移的細胞和殘留的matrigel，加入水或者PBS洗兩次，去除殘留的染色液；
2.6、將transwell小室放在顯微鏡下拍照。

結果示例：

圖 A 細胞劃痕實驗圖；B，C 細胞遷移和侵襲實驗圖