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agomir是一種用于微RNA功能研究的化學修飾的雙鏈微RNA模擬物,它可以模仿內源性的成熟微RNA,與靶基因mRNA結合,從而調節其表達。agomir與普通的微RNA模擬物相比,具有更高的穩定性和活性,更易通過細胞膜和組織間隙,富集于靶細胞。因此,agomir可以用于體內實驗,通過注射、吸入或喂食等方式給予動物,觀察微RNA對生理和病理過程的影響。
agomir的合成需要對微RNA模擬物進行特殊的化學修飾,包括在反義鏈上加入2個硫代磷酸酯鍵(phosphorothioate)在5′端,4個硫代磷酸酯鍵在3′端,以及3′端加入膽固醇(cholesterol)基團,同時對全長核苷酸進行2′-甲氧基(2′-methoxy)修飾。這些修飾可以提高agomir的穩定性,防止被核酸酶降解,增強其與細胞膜的親和力,促進其進入細胞。
agomir的使用需要注意以下幾點:
? agomir的設計需要參考miRBase數據庫中的微RNA序列,選擇合適的靶基因和靶組織。
? agomir的劑量和給藥方式需要根據實驗目的和動物模型進行優化,一般建議從低劑量開始逐步增加,觀察效果和副作用。
? agomir的效果持續時間一般為1周以上,甚至可達5-6周,因此需要合理安排實驗時間點和取樣方式。
? agomir的使用需要配合相應的負對照(negative control),即沒有靶基因結合位點的隨機序列修飾物,以排除非特異性效應。
? agomir的使用需要結合其他方法進行驗證,如RT-qPCR、Western blot、免疫組化等,以評估微RNA和靶基因表達水平的變化。