細胞生物學平臺

ROS是什么？

ROS也就是活性氧（reactive oxygen species，ROS）指來源于氧的自由基和非自由基。ROS在細胞生命，應激和死亡中具介導作用，并且不同濃度的ROS在其中起著截然不同的作用，從而導致細胞命運的不同。因此對ROS的濃度或相對水平進行可靠的測量非常有必要。

實驗儀器和材料

細胞培養基

胎牛血清

青霉素/鏈霉素

胰酶

PBS

DMSO

活性氧（ROS）試劑盒

血球計數板

CO2培養箱

倒置熒光顯微鏡

實驗步驟

1、細胞傳代培養：當細胞長至80-90%時，去除培養基，加入PBS洗1-2次，去除PBS后，加入1ml胰酶消化1-3min后，加入3ml完全培養基中和胰酶終止消化，將消化的細胞轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min。倒掉上清后，加入3ml培養基重懸細胞，1:3傳代至培養皿中培養。

2、將長到培養皿80%-90%的內皮細胞用胰酶消化下來，1000rpm離心，去除上清，加入完全培養基重懸細胞，將細胞分別種在6孔板中，每孔種1×106個細胞。

3、待細胞貼壁后，使用不同的含藥血清的培養基培養細胞。

4、48h后，加入DCFH-DA于培養基中，稀釋倍數為1:1000。

5、孵育1h后，直接將細胞置于熒光顯微鏡下拍照。

實驗結果